凝膠電泳染色:使用什麽?

电泳是鉴定和分离大分子的常用实验室程序。它是由莫斯科的一位大学科学家于1800年代初首次观察到的。像许多发现一样,这是偶然的,但事实证明它对许多研究场景都有用。通过施加电流,技術人员可以使用颗粒的负电荷或正电荷,使它们迁移穿过琼脂糖凝胶等多孔基质。当样品中存在带正电的分子时,它们将向负电流(阴极)蠕变,而带负电的分子将向正电流(阳极)迁移。

除了電源和凝膠外,該動力學測試還需要緩沖液以幫助防止溫度和pH值過高。所用凝膠的類型取決于樣品和應用。凝膠是“固體”,但多孔。在凝膠內,較大的分子將更慢地移動,而較小的分子將快速移動。因此,分子大小是分離樣品和鑒定分子的另一種方法。

那麽,既然我們了解了電泳的動力學,我們如何看待這些粒子在何處移動?這些分子可能是“宏觀”的,但它們仍然太小而無法用肉眼觀察。我們實驗的**一個必需成分是汙點。一組染料使我們可以直觀地看到顆粒所經過的路徑。從那裏,我們可以捕獲圖像以記錄結果。

DNA凝膠汙漬

存在幾種在凝膠電泳過程中對核酸染色的選擇。溴化乙錠(EtBr)是最著名和最常用的DNA染料。它是一種結合DNA的嵌入劑,當暴露于紫外線下時其熒光增加20倍。EtBr是**的DNA染色劑,是許多研究實驗室的理想選擇。但是,EtBr必須小心使用,因爲它是已知的誘變劑。另外,EtBr要求暴露在紫外線下才能看到,但是會發生分子損傷。當將DNA用于下遊應用如克隆時,這就提出了一個問題。

电泳凝胶

核酸染色,通過紫外線觀察。

已经开发出替代的DNA染料,例如SYBR Safe,它们不具有与EtBR相同的诱变特性。SYBR Safe不被认为是危险的,可以使用实验室的常规污水处理系统进行处理。此外,它在蓝光下发出荧光,从而防止了使用紫外线时发生的DNA损伤。

已显示许多DNA染色剂可抑制聚合酶链反应(PCR)。当需要高PCR效率(例如实时定量PCR)时,可行的DNA染料应为Eva Green。与其他常见的电泳染料相比,它在较小程度上限制了PCR。Eva Green还比EtBr等传统污渍更安全。

蛋白質凝膠汙漬

與DNA凝膠類似,蛋白質凝膠染色有多種選擇。兩種最常見的汙漬是考馬斯亮藍和銀染。考馬斯是一種陰離子染料,可與蛋白質非特異性結合。一旦去除多余的汙漬,蛋白質條帶將顯示爲藍色條帶。考馬斯染色由于其易用性和可承受的成本而成爲最普遍的蛋白質染色方法。

相反,銀染色比考馬斯亮靈敏,可以檢測相對少量的蛋白質。但是,靈敏度是有代價的,因爲銀染劑還可以與多糖和核酸結合,從而在銀染的凝膠上産生雜散帶。

**的想法

電泳凝膠和緩沖溶液中的化學物質也會影響染料的性能,因此您的家庭作業也是如此。根據您實驗室中的樣品,應用和記錄的測試結果,選擇具有**潛力的良好測試結果。使用有關樣品和試劑制備,染料量,膠凝時間和溫度,脫色,存儲和其他關鍵任務的**實踐。**,記住你的手套!