南北印迹用水



超純水用于印迹的許多步驟:樣品,緩沖液,凝膠和沖洗液的制備。在進行自身印迹之前,無論是進行Southern印迹還是Northern印迹,樣品制備都需要特別注意用于保護原材料(分別爲DNA或RNA)的水質。

主要的樣品制備步驟是通過提取,擴增和預處理使RNA變性以防止形成堿基配對的二級結構,從而進行分離。

水質參數

  • 離子
    帶電分子可以通過改變溶液(緩沖液,樣品等)的整體電荷,然後加速或延遲遷移來幹擾遷移電泳步驟。

    在杂交步骤中離子的浓度也很重要。为了在**条件下进行杂交,应注意特定的浓度。从几乎没有離子的水开始(25°C时的电阻率18.2MΩ•cm)可确保在正确的離子强度和pH值下制备缓冲液。 
  • 有機物
    有机分子会在杂交过程中产生干扰。那些带负电荷的分子可以像DNA和RNA一样起作用,并且可以代替DNA或RNA非特异性结合。带正电的分子实际上可以与DNA或RNA和寡核苷酸结合,从而阻碍或干扰杂交过程。因此,建议使用低TOC值(<10 ppb或µg / L)以确保有機物含量方面的水质良好。 
  • 核酸
    酶核酸酶降解NA樣品。使用超濾可有效去除這些酶。在將水從系統中抽出並使用之前,將超濾器安裝在淨化單元的出口。請參閱“ 無核酸酶水”部分。 
  • 細菌
    細菌释放可降解核酸样品的核酸酶。它们含有DNA,可能会干扰要检查的DNA。最终,它们释放出離子和有機物,这些離子和有機物可能会对印迹步骤产生负面影响。用Ultrafilter(BioPak)纯化的水細菌含量<0.1 cfu / mL。 
总而言之,考虑到与印迹步骤相关的整个过程,水应不含核酸酶和細菌,具有高电阻率和低TOC。所有这些都可以在输送高纯度水的净水设备的使用点(出口)处使用超滤设备获得。