核酸印迹


核酸印迹是一种成熟的技術,用于鉴定先前在凝胶中分离的特定核苷酸序列的存在。(

Southern印迹以其发明者英国生物学家Edwin Southern命名。在Southern印迹中,分析DNA,在Northern印迹中如果是RNA。在这两种情况下,来自完整凝胶的DNA或RNA都将转移到一块硝酸纤维素膜或尼龙膜上。然后将膜暴露于杂交探针,即具有特定序列的单个DNA片段,要确定其在靶DNA(或RNA)中的存在。对探针DNA进行标记,以便可以通过射线照相,荧光或化学发光法对其进行检测。

印迹的**步是核酸從凝膠到膜的轉移,這通常使用毛細管轉移方法完成。在此過程中,將凝膠放置在紙芯的頂部,該紙芯浸入包含轉移緩沖液的容器中。膜夾在凝膠和一堆吸收性材料(通常是幹紙巾)之間,該吸收性材料通過毛細管作用使轉移緩沖液通過凝膠。然後,凝膠中的核酸分子被緩沖液攜帶並固定在膜上。真空吸印是另一種越來越流行的吸印程序,因爲它速度更快且回收率很高。真空印迹法還使用緩沖液流將核酸帶轉移到膜上,但是它使用真空而不是毛細管作用來創建該流。

一旦轉移完成,最初在凝膠上的所有核酸帶就被固定(印迹)在膜上,雜交過程可能開始。將膜與一小段DNA或RNA(探針)一起孵育,該DNA或RNA的序列與膜中特定的DNA或RNA序列互補。這允許探針與膜上的特定DNA片段雜交或結合。探針先前已被標記,通常用放射性原子,熒光染料標記或用酶標記,該酶在與合適的底物孵育後會産生化學發光信號。雜交後,標記的探針允許從膜上許多不同的DNA片段中檢測目標DNA片段。